شرکت زیست فناوران سانا آزما

بروسلوز یک بیماری زئونوز است که علاوه بر انسان می تواند طیف وسیعی از دام ها و نیز حیوانات وحشی دیگر را درگیر کرده و با ایجاد سقط های خود به خودی در دام آلوده از طریق کاهش زادولد آنها خسارات هنگفتی به اقتصاد جامعه تحمیل می کند و به عنوان یک مشکل اساسی بهداشت جامعه می باشد .روش ELISA جهت تعیین میزان تیتر آنتی بادی موجود در سرم­ گوسفند مورد استفاده قرار می گیرد.  این کیت به دلیل استفاده از پروتئین نوترکیب به جای باکتری از ویژگی های سلامت، سریع و قابل اعتماد بودن برخوردار بوده و قادر است آنتی بادی های علیه باکتری بروسلا در گوسفند را اندازه گیری کند.اساس آزمون:در این آزمون، پروتئين نوترکيب به عنوان آنتی ژن، همراه با بافر رقيق کننده به کف ميکروپليت­ها چسبانده شده که پس از طي دوره انکوباسيون، پليت ها توسط بافر شستشو شسته مي­شوند و در نتیجه آن عناصر غير باند با شستشو خارج مي گردند.پس از اضافه کردن سرم و طي دوره انکوباسيون پليت ها مجددا شستشو و در مرحله بعد آنتي بادي کونژوگه با HRP اضافه مي شود. پس از اضافه کردن سوبستراي حاوي کروموژن و در نهايت افزودن محلول متوقف کننده، تيتر آنتي بادي توسط دستگاه  ELISA Reader با طول موج nm ۴۵۰ خوانده می شود.اجزای کيت:                        اجزا        تعداد ( حجم)   پليت ۹۶ حفره اي الحاق شده با آنتی ژن          ۱عدد                   سرم کنترل مثبتml         ۵/۰                   سرم کنترل منفيml         ۵/۰                 بافر رقیق کننده سرمml          ۵۰                  بافر شستشو ۲۰Xml          ۲۵                  کونژوگه(HRP)ml         ۶/۰             بافر رقیق کننده کونژوگهml           ۱۰             معرف سوبسترا (TMB)ml           ۱۰    محلول متوقف کننده (Stop Solution) ml          ۱۰یاد آوری:          تمام اجزای بالا باید در دماي °c۷-  ۲ نگهداري شوند. لوازم مورد نياز:ميکروتیوپدستگاه Reader ELISA با طول موج nm ۴۵۰ استوانه مدرج سمپلر چند کاناله و تک کاناله با حجم هاي متفاوت   یاد آوری:  پیش از استفاده ، تمام مواد مورد مصرف باید به دماي اتاق رسانده شوند.نمونه گيري:خون گيري و جداسازي سرم  و نگهداري در دماي اتاق براي ۴ روز و يا در دمای C°۲۰-  براي نگهداري طولاني مدت مطابق روش هاي معمول جمع آوري سرم است. سرم هاي مورد استفاده مي بايست به نسبت ۱۰۰/۱ در بافر رقيق کننده رقيق گردند. لازم به ذکر است که سرم هاي کنترل مثبت و منفي نياز به رقيق سازي ندارند.   بافرهای رقيق کننده: بافرهای رقیق کننده موجود،آماده­ استفاده می باشند و نیاز به آماده­ سازی ندارند.           تهيه بافر شستشوي X ۱ :پیش از استفاده، محلول X۲۰ را خوب تکان دهيد. جهت تهيه بافر شستشوي X۱،ml ۱ از بافر X ۲۰  شستشوي موجود درکيت را برداشته و با ml ۱۹ آب مقطر مخلوط كنيد.توجه:تقريباً ml ۱۸۰  بافر شستشوی X۱ به ازاي هر ميکرو پليت مورد نياز است.  کونژوگه: کونژوگه را به نسبت ۱۰/۱ (نسبت ۱میکرولیتر کونژوگهHRP  به ۹میکرولیتر بافر ) با بافر رقیق کننده کونژوگه رقیق نموده و ظرف مدت چند ساعت مصرف گردد. تهيه محلول سوبسترا:این محلول آماده استفاده می باشد .(به ازاي هر ميکروپليت ml۵ مورد نیاز است.)محلول متوقف کننده : این محلول آماده استفاده می باشد .(به ازاي هر ميکروپليت ml۵ مورد نیاز است.) روش انجام آزمون الايزا:  مرحله اول:۱.  ميکروپليت الحاق شده با آنتی ژن را از پوشش خارج کنيد.۲.  سرم ها را به نسبت ۱۰۰/۱ با محلول رقيق کننده بصورت مجزا رقيق سازيد . لازم به ذکر است سرم های کنترل مثبت و منفی نیاز به رقیق سازی ندارند.۳.  µl ۵۰ از سرم هاي رقيق شده، همچنين µl ۵۰ از سرم هاي کنترل مثبت­ و منفي را به حفره هاي میکروپلیت اضافه کنيد.۴.  پس از درپوش گذاشتن روی پلیت به مدت ۳۰ دقیقه در دماي اتاق انکوبه کنيد.مرحله دوم: (شستشو)۱. محتويات حفره ها را کاملاً خالي نمائيد.۲.  µl۳۰۰ از محلول شستشو را به هر حفره اضافه و به مدت ۱-۲ دقيقه به صورت ملایم به پلیت ضربه بزنید.۳. مرحله ۲ را سه بار تکرار کنيد.۴. حفره ها را کاملا ًخالي نمایید و با اعمال ضربه های متوالی بر روی پارچه و یا کاغذ آن ها را هرچه بیشتر خشک نمایید.مرحله سوم:  (اضافه کردن کونژوگه، سوبسترا و محلول متوقف  کننده)۱.  µl ۵۰ از محلول کونژوگه به هر حفره اضافه کرده و پس از درپوش گذاشتنروی پلیت به مدت ۳۰ دقیقه در دماي اتاق انکوبه کنيد.۲.  سه مرتبه پليت را خالي و شستشو کنيد.( مطابق مرحله دوم)۳. µl ۵۰ از محلول سوبسترا به هر حفره اضافه کنيد و به مدت ۱۰ دقيقه در دماي اتاق و به دور از نور مستقیم انکوبه کنيد.۴.  µl ۵۰ از محلول متوقف کننده به هر حفره اضافه و به صورت ملایم به پلیت ضربه بزنید. *(قبل از خوانش پلیت ، کف حفره ها را با پنبه تمیز پاک نمایید؛ به طوریکه پرز به کف چاهک ها نچسبد.)۵. ميزان جذب را با طول موج nm ۴۵۰ اندازه گيري کنيد.یادآوری : جهت استفاده  بقیه چاهکها؛ پس از اتمام کار پلیت را خالی کرده و با اعمال ضربه های متوالی بر روی پارچه یا کاغذ پلیت را کاملا خشک نمایید ، سپس پلیت را همراه با دسی کانت (رطوبت گیر) موجود در کیت ، داخل پوشش زیپ دار گذاشته و در یخچال قرار دهید.  نتایج:برای اعتبار دهی به نتایج آزمون، میانگین جذب نوری کنترل منفی باید کمتر از ۱۸/۰و تفاضل میانگین کنترل منفی و کنترل مثبت بزرگتر از ۱۵/۰ باشد.یادآوری:عدم ثبات دمای آزمایشگاه منجر به مقادیر بالاتر یا پایین تر جذب نوری خواهد شد. مقادیر نمونه مورد آزمون نسبت به مقدار کنترل ها (مثبت و منفی) سنجیده شده و نتایج آزمون به این نحو اعتبار دهی خواهند شد.کنترل مثبت به نحوی استاندارد شده که نمایانگر مقدار شاخص آنتی­بادی بروسلا در سرم گاو باشد. بنابراین مقادیر نسبی آنتی بادی ها در نمونه های سرم می تواند با ارجاع به مقادیر کنترل مثبت محاسبه شود. این ارتباط تحت عنوان نسبت S/P بیان­ می شود.

کیت الایزای تشخیص بروسلوز جهت تعيين ميزان تيتر آنتي بادي موجود در سرم گاو مورد استفاده قرار مي گيرد. اين کيت به دليل استفاده از پروتئين نوترکيب به جاي باکتري از ويژگي هاي سلامت، سرعت و قابل اعتماد بودن برخوردار بوده و قادر است آنتي بادي هاي عليه باکتري بروسلا در دام را اندازه گيري کند. هدف از طراحي كيت الایزای تشخيص بروسلوز این است كه بتواند به عنوان روشی مناسب و بسیار دقیق جهت جایگزینی روشهای رایج مانند رایت و ۲ME و کیتهای وارداتی به کار رود.شرح محصولبروسلوز يك بيماري مشترك بين انسان و دام است كه انتشار جهاني دارد و  از بيماري هاي آندميك شناخته شده در ايران است . تشخيص سريع و مناسب اين بيماري نقش مؤثري در بهبود بهداشت عمومي دارد. با توجه به شیوع این بیماری در ایران اهمیت تشخیص به موقع و سریع آن، انتخاب روش آزمایشگاهی اختصاصی و دقیق را ضروری می نماید. کیت الایزای طراحی شده آنتی بادی های علیه باکتری بروسلای موجود در سرم گاو را اندازه گیری کرده و نتایج با دقت بالا حاصل می شود. این کیت در مقایسه با محصولات خارجی عملکرد خوبی داشته و کنترل کیفی آن حاکی از دقت و حساسیت مطلوب این محصول است. از مزیت های این کیت سادگی محاسبات آن است. با استفاده از این کیت، علاوه بر نتیجه کیفی مبنی بر بیمار بودن یا عدم بیماری دام با تفسیر نتایج جذب نوری (OD)، میزان تیتر آنتی بادی علیه باکتری بروسلا در سرم را نیز با یک فرمول ساده می توان اندازه گیری کرد. مقادیر نمونه مورد آزمون نسبت به مقدار کنترل ها (مثبت و منفی) سنجیده شده و نتایج آزمون به این نحو اعتبار دهی می شوند.شرح کلی از اصول روش سنجشکیت الایزای تب مالت موجود بر اساس سنجش ایمونولوژیکی  تهیه شده است. در اين آزمون، پروتئين نوترکيب به عنوان آنتي ژن شناساگر باکتری ، همراه با بافر رقيق کننده به کف ميکروپليت ها چسبانده شده که پس از طي دوره انکو باسيون، پليت ها توسط بافر شستشو، شسته مي شوند و در نتيجه آن، عناصر غير باند با شستشو خارج مي گردند. پس از اضافه کردن سرم و طي دوره انکوباسيون پليت ها مجددا شستشو و در مرحله بعد آنتي بادي کونژوگه با  HRPاضافه مي شود. پس از اضافه کردن سوبستراي حاوي کروموژن و در نهايت افزودن محلول متوقف کننده، جذب نمونه توسط دستگاه  ELISA Reader  خوانده مي شود.این کیت برای استفاده در آزمایشگاههای تشخیصی طراحی شده است که در آنجا آزمایشات مربوطه تحت نظارت افراد متخصص انجام می شود.دیتای فنی:آنتی ژن: پروتئین های دیواره خارجی باکتری بروسلانمونه مورد آزمایش: سرم گاویحساسیت (Sensitivity) : ۱۰۰ درصداختصاصیت (Specificity): ۷/۹۸درصدتکرار پذیری (Repeatability) : ضریب تغییرات (CV)کمتر از ۱۰ به دست آمده و تکرار پذیری کیت مورد قبول می باشد.تفسیر نتایج: عدد به دست آمده از OD،  نتایج آزمون را به شرح زیر تفسیر می کند:۲۶/۰ <OD   نمونه ها دارای آنتی بادی های ضد بروسلا بوده و مثبت هستند.۲۱/۰> OD    نمونه ها عاری از آنتی بادی های ضد بروسلا بوده و منفی هستند.۲۵/۰≥ OD ≥۲۲/۰ نمونه های مشکوک. شماره کاتالوگ (Cat No.): ردیفمحصولشماره کاتالوگ۱کیت الایزای بروسلوز گاوی تک پلیتهBru-B۰۱۲کیت الایزای بروسلوز گاوی سه پلیتهBru-B۰۲۳کیت الایزای بروسلوز گاوی پنج پلیتهBru-B۰۳ خلاصه روش کار با کیت الایزای بروسلوز دامیشروع حجم کنترل مثبت، کنترل منفی، نمونه سرم (µl)زمانShake at room temperature/ ثانیهزمان انکوبایسوندر دمای اتاق/ دقیقهدفعات شستشوحجم محلول شستشو (µl)حجمکانژوگه آنزیمی(µl)زمانShake at room temperature/ ثانیهزمان انکوبایسوندر دمای اتاق/ دقیقه۵۰۱۵۳۰۳۳۰۰۵۰۱۵۳۰ادامه دفعات شستشو حجم محلول شستشو (µl)حجم سوبسترا(µl)زمان انکوبایسوندر دمایاتاق/ دقیقهStopSolution(µl)حداکثر زمان خوانش/دقیقهفیلتر/nmفیلتر شاهد در صورت امکان/nm۳۳۰۰۱۰۰۱۰۱۰۰۳۰۴۵۰۶۳۰ شرح محتویات کیت۱- پلیت های پوشش داده شده: شامل ۹۶ چاهک که با آنتی ژن شناساگر پوشش داده شده اند.۲- بافر رقیق کننده سرم: یک ویال ۲۵ میلی لیتری. ۳- سرم کنترل مثبت: یک ویال یک میلی لیتری آماده مصرف.۴- سرم کنترل منفی: یک ویال یک میلی لیتری آماده مصرف.۵- کونژوگه آنزیمی (HRP) : یک ویال ۱ میلی لیتری۶-. بافر رقیق کننده کانژوگه: یک ویال ۱ میلی لیتری۷- محلول شستشو دهنده غلیظ (۲۰X) : یک ویال ۵۰ میلی لیتری محلول شستشو که برای تهیه محلول شستشوی آماده مصرف لازم است این محلول به نسبت ۲۰/۱ با آب دیونیزه رقیق شود.۸- معرف سوبسترا (TMB): یک ویال ۱۰ میلی لیتری محلول آماده مصرف۹- محلول متوقف کننده واکنش: یک ویال ۱۰ میلی لیتری اسیدسولفوریک یک نرمال.۱۰- دستورالعمل استفاده از کیت مواد و وسایل مورد نیاز که در کیت موجود نیست :۱- سمپلر ۱۰، ۱۰۰ و ۲۰۰ میکرولیتری دقیق۲- آب دیونیزه۳- انکوباتور ۱ ± ۳۷ درحه سانتیگراد۴- کاغذ جاذب رطوبتکیت تشخیص تب مالت در گاو

بيماري گامبورو يک بيماري ويروسی حاد است که اساساً جوجه هاي گوشتي درحال رشد را تحت تأثير قرار مي دهد. اين بيماري بسيار مسري، در حال حاضر در سرتاسر جهان شيوع داشته و ميزان تلفات آن در اثر ويروس خيلي حاد، به ۷۵-۵۰% نيز می رسد. ويروس عامل این بیماری (IBDV)، تمايل زيادي به سلولهاي لنفاوي موجود در بورس فابریسیوس داشته، به طوري که اختصاصاً سلولهاي پيش ساز سلولهاي لنفاويB راتحت تأثير قرارداده و باعث سرکوب سيستم ايمني مي گردد.روش   ELISA از دیرباز جهت تعیین میزان تیتر آنتی بادی موجود در سرم جوجه ها مورد استفاده قرار گرفته است. این کیت با استفاده از آنتی ژن ایمنی زای دیواره خارجی ویروس به جای ویروس کامل از ویژگی های سلامت مصرف، سریع و قابل اعتماد بودن برخوردار بوده و قادر است آنتی بادی های علیه ویروس گامبورو را اندازه گیری کند.این کیت در مقایسه با محصولات خارجی عملکرد خوبی داشته و کنترل کیفی آن حاکی از دقت و حساسیت مطلوب این محصول است. از مزیت های این کیت سادگی محاسبات آن است. با استفاده از این کیت، علاوه بر نتیجه کیفی مبنی بر بیمار بودن یا عدم بیماری دام با تفسیر نتایج جذب نوری (OD)، میزان تیتر آنتی بادی علیه ویروس گامبورو در سرم را نیز با یک فرمول ساده می توان اندازه گیری کرد. مقادیر نمونه مورد آزمون نسبت به مقدار کنترل ها (مثبت و منفی) سنجیده شده و نتایج آزمون به این نحو اعتبار دهی می شوند.